儿童B系急性淋巴细胞性白血病CD133-2的生物学特性及其分子机制初步研究

【摘要】目的：探究CD133-2在儿童B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）作为干细胞标志物表达的意义及其作用的分子机制，从而明确CD133-2是否为儿童B-ALL的白血病干细胞（LSC）标志，也为进一步研究儿童B-ALL的分子发病机制奠定实验基础。方法：1、流式细胞术检测初诊和复发儿童B-ALL（共38例，包含初诊34例，复发4例）骨髓单个核细胞（BM-MNCs）CD133-2的表达（IgG1-PE为同型对照），并采集5例CD133-2阳性表达(比例≥20%)的B-ALL患儿（初诊4例，复发1例）BM-MNCs，免疫磁珠分选法（MACS）分选纯化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四组亚群细胞，体外甲基纤维素半固体集落培养（包含SCF、GM-CSF、G-CSF、IL-3、IL-6、EPO等成分），观察各亚群集落形成能力，并对培养后形成的集落细胞瑞氏-姬萨姆染色做形态学鉴定。2、6例CD133-2表达阳性的B-ALL（初诊4例，复发2例）患儿BM-MNCs中MACS分选纯化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四组亚群细胞，以CD133-2+CD19-亚群细胞为实验组，CD133-2-CD19+亚群细胞为对照组，采用Real-timePCR法和基因芯片试剂盒，分析与TGF-β信号通路相关的84个基因分子在以上两群细胞中的表达差异。结果：1、流式细胞仪检测结果显示：38例儿童B-ALL中，CD133-2的阳性表达率为60.5%（比例≥20%为表达阳性）。其中5例儿童B-ALL的BM-MNCs经MACS分选纯化后，体外甲基纤维素半固体集落培养14天，CD133-2+CD19-细胞群在第5天出现红系集落，第7天后出现混合集落，第10天时集落较第5天增长10倍，增长速度明显加快，第12天时集落状态良好，第14天后集落未再增加。对生长状态良好的集落细胞瑞氏-姬萨姆染色，CD133-2+CD19-形成的集落中可见红系、粒系、巨噬和单核系细胞。其他亚群形成集落不明显。比较各亚群细胞集落形成方面差异具有显著的统计学意义（P<0.001）。2、Real-timePCR检测结果显示：初诊儿童B-ALL中CD133-2+CD19-细胞亚群与TGFβ信号通路下游DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6基因的上调有关，与SERPINE1基因的下调有关；复发组中CD133-2+CD19-细胞亚群与TGFβ信号通路下游TGFβ1、LTBP1基因的上调有关，与IGFBP3、SERPINE1基因的下调有关。结论：1、体外半固体集落培养表明儿童B-ALL中CD133-2+CD19-细胞亚群具有多向分化能力，结合我们前期体外悬浮培养结果提示其具有长期增殖能力，说明此亚群具备了LSC的特性，由此CD133-2+CD19-亚群可能是儿童B-ALL来源的LSC免疫表型标志。2、DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6、SERPINE1以及TGFβ1、LTBP1、IGFBP3、SERPINE1等TGFβ信号通路的转录分子分别参与了初诊和复发B-ALL患儿CD133-2+CD19-亚群细胞生物学特性的调控，这些分子的异常表达可能与儿童B-ALL的发病或复发有关。
【作者】庞丽；
【导师】赵文理；
【作者基本信息】苏州大学，儿科学，2014，硕士
【关键词】儿童B系急性淋巴细胞白血病；CD133-2；白血病干细胞；TGF-β信号通路分子；

【参考文献】
[1]张庆.日本铁路九州新干线板式无碴轨道介绍[J].中国铁路.2002(04)
[2]付慧娟.地域文化符号在金华火腿包装设计中的应用[D].浙江理工大学,艺术设计（专业学位）,2014,硕士.
[3]徐晓春,楼金伟,陆三明,谢巧勤,褚平利,尹滔.安徽金寨银山钼-铅-锌多金属矿床Re-Os和有关岩浆岩~(40)Ar-~(39)Ar年龄测定[J].矿床地质,2009,05:621-632.
[4]宋亮亮.拱桥三维建模及倒塌模拟分析[D].浙江工业大学,2009.
[5]林若楠,刘海林.求解4G网络建站问题进化多目标算法[J].广东工业大学学报,2014,02:64-69.
[6]雷小康,刘明雍,闫茂德,李闻白.一种移动机器人的禁忌搜索自主导航算法[J].控制与决策,2011,09:1310-1314.
[7]戴国鸿.论白先勇小说中的战争书写[D].扬州大学,中国现当代文学,2012,硕士.
[8]邱宝林.山东省高校体育场馆资源利用与经营管理的探究[D].山东体育学院,体育教学,2011,硕士.
[9]管爽.山东省儿童青少年饮料消费现状及其影响因素分析[D].山东大学,营养与食品卫生学,2013,硕士.
[10]陶跃.因素分析与评价型决策支持系统研究与应用[D].长春理工大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[11]王艳光.基于粗糙描述逻辑的语义网的研究[D].吉林大学,软件工程,2013,硕士.
[12]王超,骆克任.基于网络舆情的旅游包容性发展研究——以湖南凤凰古城门票事件为例[J].经济地理,2014,01:161-167.
[13]赵文斌.深部含软岩峒室开挖的模型试验及数值模拟研究[D].北京化工大学,工程力学,2013,硕士.
[14]张应文.沈阳欧美亚大厦施工项目进度管理应用研究[D].吉林大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[15]徐洲.社会主义市场经济下的税收政策研究[D].吉林大学,学科教学,2014,硕士.
[16]张世军.妙脆角产品山东地区市场营销战略与策略研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[17]赵华洲.NHE-1基因在人肝癌细胞增殖/凋亡调控中的作用[D].第四军医大学,外科学,2004,硕士.
[18]黄永安.神经网络在结构主动控制中的理论与应用[D].西北工业大学,结构工程,2004,硕士.
[19]黄程.大学校园纪念性景观设计研究[D].华中科技大学,风景园林,2013,硕士.
[20]上官琳琳.YH科技公司销售人员绩效考核体系优化研究[D].兰州理工大学,工商管理,2014,硕士.
[21]陈璐,杨百寅,井润田,王国锋.家长式领导、冲突与高管团队战略决策效果的关系研究[J].南开管理评论,2010,05:4-11.
[22]姚金雨.我国民族院校国际化研究[D].武汉理工大学,高等教育学,2012,硕士.
[23]蔡龙至.英汉被动句转换的对称性分析[D].吉林大学,汉语国际教育（专业学位）,2013,硕士.
[24]曲帅.人参有效活性成分的提取分离及含量测定[D].吉林大学,生物医学工程,2013,硕士.
[25]韩艳珍.毛泽东反腐败思想研究[D].西南大学,马克思主义基本原理,2014,硕士.
[26]但智渊.论反向刺破公司面纱制度[D].华中科技大学,民商法学,2013,硕士.
[27]刘鹏.一种门限自适应的频谱感知算法研究[D].海南大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[28]王小斌.延安石化厂部门职责设置问题研究[D].西北大学,高级工商管理（EMBA）（专业学位）,2012,硕士.
[29]江友波,孙晓光,安德强,周云.炼钢、铸锭过程中产生非金属夹杂物的原因[J].一重技术.2003(03)
[30]王玉辉,周广胜.内蒙古地区羊草草原植被对温度变化的动态响应[J].植物生态学报,2004,04:507-514.
[31]张红卫.基于科技文献的时序主题链构建方法研究[D].大连理工大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[32]蒋文莉.绿茶鲜汁加工工艺及品质研究[D].浙江大学,茶学,2004,硕士.
[33]马红邑.西学的恶化对中国早期现代化的影响[D].山东大学,政治学理论,2013,硕士.
[34]何山,李向欣,邢卫宏,杜伟,王云鹏.国产特大型交流调速主井提升机电控系统[J].冶金自动化,2003,02:47-50+55.
[35]白思明.基于NTCIP协议的匝道信号控制器研究与开发[D].北方工业大学,检测技术与自动化装置,2014,硕士.
[36]蓝枧卿.基于BBM模型的川西山区崩坡积混合土非饱和弹塑性本构关系研究[D].西南交通大学,岩土工程,2013,硕士.
[37]陶明山.双羧基甜菜碱型两性表面活性剂的合成及性能研究[D].安徽大学,有机化学,2014,硕士.
[38]岳继光,杨臻明,孙强,王晓保.区间时间序列的混合预测模型[J].控制与决策,2013,12:1915-1920.
[39]史改丽,邓小华.黔西南州植烟土壤磷含量区域分布特征[J].安徽农业科学,2014,33:11682-11685.
[40]刘娟.基于D-A及D-A-D结构有机太阳能电池材料的密度泛函研究[D].西南大学,物理化学,2014,硕士.
[41]傅临泰.圆柱液体声透镜[J].舰船科学技术.1992(02)
[42]邬浩佶.中国股票市场的行业配置研究[D].浙江工商大学,产业经济学,2012,硕士.
[43]具春光.65岁以上脑血管病患者DSA分析及病因研究[D].吉林大学,神经病学,2014,硕士.
[44]张莹.基于灰度投影的电子稳像算法研究[D].华中科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[45]李靓.沈阳出入境检验检疫局员工绩效考核体系研究[D].吉林大学,工商管理,2012,硕士.
[46]刘百祥.DNA电化学生物传感器设计优化技术研究[D].华东理工大学,2012.
[47]王静.斑马鱼心脏发育候选基因HPRG1相关品系的建立及初步功能研究[D].湖南师范大学,遗传学,2014,硕士.
[48]张东云.基于.NET平台的会议室管理模块的设计与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[49]王璐.含“结”碳纳米管在扭转过程中力学性质及石墨带在碳管内嵌入行为的研究[D].南京师范大学,2014.
[50]王军慧.供水管网的水力水质模拟及不确定性研究[D].重庆大学,市政工程,2014,硕士.